آموزش وردپرس

تست Coomb`s wright و 2ME

تست coomb`s wright و تست 2ME ( تست تاییدی بروسلوز یا همان تب مالت )

بروسلا عامل بیماری تب مالت یا تب راجعه یک باسیل گرم منفی است.4 نوع از بروسلا وجود دارد :
1. B.Abortus
2.B.melitensis
3.B.Suis
4.B.Canis
تشخیص قطعی بروسلوز ( تب مالت ) با استفاده از بررسی کشت خون یا کشت مغز استخوان حاصل میشود اما این روش ها با محدودیت هایی از قبیل زمانِ طولانی انجام تست و منفی بودن جواب آن در اغلب موارد همراه است! بنابراین به سراغ روش هایِ دیگرِ تشخیصی میرویم.
از این بین تست های سرولوژی از اهمیت خاصی برخوردارند.مهمترین تست سرولوژیِ تشخیص بروسلوز تست wright است.این تست هم در جایگاه خود با مشکلاتی روبه روست و تنها ، پاسخ مثبتِ آن اهمیت دارد.این تست تنها مثبت و منفی رو گزارش میکند ( از 1/80 م به بالا مثبت گزارش میشود ).کلاسِ آنتی بادی در تست رایت قابل تشخیص نیست.

بیماری بروسلوز از نظر بالینی به 3 مرحله تقسیم میشود:

1.حاد acute: عموما 3 ماه طول میکشد با علائمِ بالینی درد ، لاغری و تب راجعه.
در صورت سرکوب نشدنِ این بیماری در مرحله ی حاد ، فرد به مرحله ی بعدی بیماری میرود.
2.تحت حاد subacute: دوره ی آن 3 الی 12 ماه.
3.مزمن chronic: با علائم خستگی ، درد های عضلانی ، آرتریت مشخص میشود.
این مراحل علاوه بر تفاوت های بالینی در کلاس آنتی بادی نیز متفاوت اند.

آنتی بادی در مرحله ی حاد از نوعِ IgM و در مرحله ی مزمن از نوعِ IgG و در موارد کمتری IgA یا IgE است. با تشخیص کلاسِ آنتی بادی ، مرحله ی بیماری مشخص میشود.

** در مواردی با فردی مواجه میشویم که علائم بالینیِ بیماری را نشان میدهد اما تست wright آن منفی است.
تست هایی که مشکلات و نواقص تست رایت را پوشش میدهند دو تست coomb`s wright و 2ME است.

تست coomb`s wright :

** در صورتی که تست رایت منفی شود این تست را انجام میدهیم ! زمانی این تست پیشنهاد میشود که پزشک به ورود بیمار به فاز مزمن بیماری مشکوک میشود.
گاهی منفی شدن تست رایت به خاطر حضور دسته ای از آنتی بادی ها به نامِ آنتی بادیِ ناقص ، مسدود کننده یا Blocking Ab است.این آنتی بادی ها را آنتی بادی های گرم هم میگویند.این دسته اکثرا از کلاس IgG و بعضآ از کلاس IgA .این کلاس به علتِ کوچکی اندازه به تنهایی نمیتوانند آگلوتیناسیون را ایجاد کنند بنابراین به یک نیروی کمکی نیاز دارند.
یکی از نیرو های کمکی برایِ آنتی بادی های ناقص، سرم coomb`s یا آنتی هیومن گلوبولین است.سرم کومبس یک آنتی بادی ضد آنتی بادی هایِ انسانی است که به ناحیه ی FC آنتی بادی هایِ انسانی متصل میشود و به انجامِ اگلوتیناسون کمک میکند.
پس در صورت منفی شدن تست رایت ، تست coomb`s wright انجام میشود تا مشخص شود آیا پاسخ واقعا منفی است یا منفی بودنِ آن به دلیل وجود آنتی بادی های مسدود کننده و عدم توانایی آنها در انجام اگلوتیناسیون است!
در صورت مثبت شدن این تست ، فرد در مرحله ی مزمن بیماری است.

مراحل انجام آزمایش :

وسایل مورد نیاز : لوله هایی که تست رایت در آن انجام شده و فاقد آگلوتیناسیون است، سرم فیزیولوژی ، anti human globulin.
روش انجام:

همان لوله هایی که تست رایت را توسط آن انجام دادیم را برمیداریم.لوله هایی که منفی شده را تا نیمه سرم فیزیولوژی میریزیم.لوله ها را به صورت بالانس داخل سانتریفیوژ قرار میدهیم.
به مدت 10 دقیقه لوله هارا با دور 2000 سانتریفیوژ میکنیم.بعد از 10 دقیقه لوله ها را از سانتریفیوژ درمی آوریم.

IMG-20150311-WA0017

مایعِ رویِ آنرا کامل خالی میکنیم.این عمل را 3 باز تکرار میکنیم.
بعد از آن به رسوبِ تهِ لوله ، 1 قطره Anti Human Globulin اضافه میکنیم. مجددا 3 الی 4 دقیقه سانتریفیوژ میکنیم.

IMG-20150311-WA0018

حال آنرا از نظر آگلوتیناسیون بررسی میکنیم.
زیر نور لوله هارا نگاه میکنیم.آخرین لوله ای که آگلوتینه در آن مشاهده شد جواب تست است.ممکن هست هیچکدام از لوله ها آگلوتینه نداشته باشد و یا همگی آگلوتینه داشته باشد.

** معمولا جواب تست coomb`s wright یا مشابه رایت است یا افزایش تیتر دارد.

تست 2ME :

2ME یا 2Mercaptoethanol یک ماده ی احیا کننده است که بیشتر روی پیوندهای دی سولفیدی اثر میگذارد.

**در صورت مثبت شدن تست رایت ، این تست انجام میشود تا توسط آن کلاس آنتی بادی و به دنبال آن مرحله ی بیماری مشخص شود.
مولکول IgM در بدن حالت پنتامری ( ستاره ای) دارد.کار 2ME این است که روی پیوندهای دی سولفیدیِ IgM اثر میگذارد و موجب مختل شدنِ شکل ستاره ای و پنتامریِ آن میشود (آنرا احیا میکند ) و قدرت آگلوتیناسیون آن را کاهش میدهد!
2ME روی مولکول IgG تاثیری ندارد.
بنابراین اگر تست رایت مثبت شد ، 2ME میگذاریم. اگر مثبت شد و آگلوتیناسیون کاهش یافت آنتی بادی از نوع IgM است و فرد در مرحله ی حاد بیماریست.اگر منفی شد و تغییری در آگلوتیناسون مشاهده نشد کلاسِ آنتی بادی از نوعِ IgG است و بیمار در مرحله ی مزمنِ بیماریست.
(( کاهش آگلوتیناسیون باید حداقل در 2 لوله مشاهده شود تا نتیجه را مثبت رد کنیم ))

مراحل انجام آزمایش :

دقیقا مشابه تست رایت

وسایل مورد نیاز : لوله آزمایش ، سرم بیمار ، بافر 2ME ، آنتی ژن 2ME ، پارافیلم

2015-03-12_20.42.15

روش انجام :

ابتدا 0.1cc سرم بیمار را همراه با 0.9cc بافر 2ME داخل یک لوله ی آزمایش میریزیم.1 ساعت به آن فرصت میدهیم تا در صورت وجود IgM در سرم فرد، بافر 2ME پیوندهای دی سولفیدی آنرا بشکند.
داخل 6 لوله ی بعدی هر کدام 0.5cc بافر 2ME میریزیم.
بعد از گذشت 1 ساعت به مرحله ی رقیق سازی میرسیم.در این مرحله 0.5cc از لوله ی اول را برمیداریم و به 0.5cc بافرِ موجود در لوله ی دوم اضافه میکنیم.
دوباره 0.5cc از لوله ی دوم را برداشته و به داخل لوله ی سوم میریزیم.
این رقیق سازی را تا لوله ی 6ام ادامه میدهیم. 0.5cc مخلوطی که از لوله ی ششم برمیداریم را دور میریزیم.

رقیق

**لوله ی هفتم تنها حاوی بافر 2ME است و از آن به عنوان شاهد منفی استفاده میکنیم.
بعد از رقیق سازی به همه ی لوله ها 0.5cc آنتی ژنِ 2ME اضافه میکنیم.
درب لوله ها ر ا توسط پارافیلم پوشانده و مدت 24 ساعت در دمای اتاق میگذاریم و بعد از آن به بررسی لوله ها میپردازیم.

20150311_102310

لوله ها را زیر نور به ارامی تکان میدهیم و نگاه میکنیم.
آخرین لوله ای که در آن آگلوتیناسیون مشاهده شد به عنوان جواب تست رد میشود.

CAM02392
(دانه های سفیدِ ریز آگلوتیناسیون است)

** جواب تست 2ME یا مشابه تست رایت است یا کاهش تیتر دارد!

(( این نوشته ممکن است دارای نواقص علمی و یا نوشتاری باشد ، لذا نویسنده , سایت با تاکید بر این نکته ، هیچ مسئولیتی در ارتباط با اعتبار این مطلب ندارد. ))

45 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی مهدیس مختار

مهدیس مختار
نویسنده بخش ایمونولوژی نویسنده بخش خون شناسی

سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

23 نظر در مورد "تست Coomb`s wright و 2ME"

avatar
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
فروشگاه فایل
Guest

مرسی کارتون عالیه

سارا
Guest

عالی

فاطمه
Guest

بسيار ممنون
خيلي مفيد بود

مارال
Guest

چرا بعد از اینکه درمان صورت گرفت تیتر Igm تا دو سال همچنان بالا میماند؟

مارال
Guest

چرا با وجود درمان بعد از دو سال تیتر Igm بالا میماند؟

گیتی
Guest

سلام ووقت بخیر مادر من حدود۵ماهه کمردرد و دل درد شدید داره اسهال و یبوست داره چندبار دکتر رفته بستری هم شده الان وزن کم کرده واصلا اشتها نداره فکر میکنید تب مالت داره؟

rostami
Guest

Big like

محمّد فلاح امیرشاهی
Member

سلام خواستم 2 نکته رو اضافه کنم که:
تو آزمایش کومبس بعد اینکه AHG رو اضافه می کنیم بهتره که نیم تا یک ساعت تو بن ماری 37 درجه قرار بدیم تا واکنش تقویت شه.
تو آزمایش 2ME هم بعد از اینکه در لوله ها رو با پارافین می بندیم باید بین 24 تا 48 ساعت تو 37 درجه نگهداری کنیم.
با سپاس

zahra
Guest

سلام ،يه سؤال دارم ،مادرم سأل قبل تيار 1/80داشت وجون الاسم بالذنب داشتند درمان كامل ،شدند امسال از دوباره جك كردندرايت1/320و2me1/120دارند .برخي للسكان ميكم بايد مجدد درمان شه وبرخي ميكن نيازي نيست ،نظر شما جيه?

روابط عمومی
Member

باسلام و آرزوی قبولی طاعات و عبادات؛ مطلب مورد سوال شما پس از بررسی به طور کامل و دقیق و قابل استناد پاسخ داده میشود.
سلامت و سربلند باشید…
روابط عمومی وبسایت علوم آزمایشگاهی پزشکی و بالینی

امیراکبری
Admin

بسیار عالی ، ممنونم

سورین زادحیدر
Member

مرسی خیلی کامل و خوب بود

pegah shirzadeh
Guest

مهدیس جان بسیارکامل بود ممنون.

مهدیس مختار
Guest

ممنون از شما پگاه جان.

دنا شیرانی
Guest

kheili khub,mamnoon

m.meschi
Guest

بسیار عالی و جامع…تلاشتون تحسین میشه…موفق باشید

مهدیس مختار
Guest

ممنون از توجه تون آقای مسچی.