آموزش وردپرس
خانه / گزارش کار / ایمونولوژی ( گزارش کار ) / آزمایش تشخیص وجود یا عدم وجود BHCG و مورفین در نمونه

آزمایش تشخیص وجود یا عدم وجود BHCG و مورفین در نمونه

Rapid test:
این تست ها آزمایش هایی هستند که در زمان کوتاه به نتیجه آزمایش میرسیم،و از زمان قدیم مرسوم بوده اما اخیرا این روش ها گسترش زیادی پیدا کرده است.این روش در آزمایشگاه های ایمونولوژی و سرولوژی کاربرد بسیاری دارد و معروف ترین آنها آگلوتیناسیون بر روی لام است که در تست wright و… به تفصیل به آنها پرداخته شده است.

گروهی از این تست ها که با دقت بسیار بالا در زمان کم به جواب میرسند اخیرا مرسوم شده اند، تست های نواری نام دارند.این تست ها براساس اینکه نوع حرکت مایع در لایه های آن به چه صورت باشد به دو دسته ی اساسی تقسیم می شوند:

1)flow through: تست هایی هستند که در طی آن نوار به صورت کامل در نمونه قرار میگیرد. مثل: نوار ادرار.

2)lateral flow:فقط قسمتی از نوار وارد می شود و نمونه بر اساس خاصیت مویینگی از چند لایه عبور می کند.

آزمایشات lateral flow در چند سال گذشته گسترش زیادی داشته اند و در زمینه های پزشکی، آزمایشگاهی، محیط زیست و … مورد استفاده قرار می گیرد. به این آزمایش ها، آزمایش های ایمونوکروماتوگرافی نیز میگویند.در این آزمایش ها به صورت عمده دو ویژگی دیده میشود:

1)نوار در این تست ها به صورت لایه لایه است و مبنای تست بر اساس خاصیت کروماتوگرافی است.

2)در این تست ازآنتی بادی استفاده میشود.

پس دلیل اینکه به آنها ایمونوکرماتوگرافی میگویند کاملا مشخص است.

به طور معمول در تست های ایمونوکروماتوگرافی یک ماده نشان دار داریم که معمولا آنتی بادی است.نشاندار کردن آنتی بادی در روش های تشخیص،کاربردی نسبتا قدیمی دارد، مثلا در روش ایمونوفلروسانس، آنتی بادی را با ماده ی فلروسنت نشان دار میکنیم یا روش الایزا…
در گروه تست های ایمونوکروماتوگرافی نشان دار کردن یک آنتی بادی با این هدف انجام میشود که برای تشخیص و ردیابی آن بدون استفاده از دستگاه و با چشم غیر مسلح اقدام به رویت جواب آزمایش کنیم، بنابراین از ذرات رنگی استفاده میکنیم که این ذرات می توانند طلای کلوئیدی، نانو ذرات ذغال و لاتکس های رنگی باشند که معمول ترین آنها طلای کلوئیدی است که پس از انجام واکنش رنگ قرمز-ارغوانی قابل رویت ایجاد میکند.

*به آنتی بادی ای که توسط یک ماده ی رنگی نشاندار شده است اصطلاحا کنژوگه میگویند.

در تست های lateral flow نوار را در نمای شماتیک به صورت زیر خواهیم دید:

DSC_0028

20150413_140402

این لایه ها همه با هم در تماس هستند و اساس حرکت مایع از قسمت سمپل به قسمت های بالایی، خاصیت مویینگی است.

در اینجا باانجام دو آزمایش با روش نواری بیشتر آشنا می شویم.

تست های نواری معمولا به دو حالت دیده می شود:

1)حالت ساندویچ: تست انتخاب شده برای این بخش تشخیص بارداری (تشخیص حضور یا عدم حضور BHCG در نمونه) است.

2)حالت رقابتی: تست انتخاب شده برای این بخش تشخیص اعتیاد (حضور یا عدم حضور Morphin در نمونه) است.

BHCG:
HCG هورمونی است که پس از بارداری در بدن خانم ها ترشح میشود( البته قبل از بارداری در بدن خانم ها وجود دارد اما سطح آن بسیار پایین و در حد mIU/ml 5-15 است). از 2 بخش تشکیل شده که شامل زنجیره های آلفا و بتا است. صد البته که زنجیره ی آلفا در سایر هورمون ها از جمله LH،FSH و TSH هم دیده می شود اما آن چیزی که باعث عملکرد اختصاصی هورمون می شود زنجیره ی بتا آن است.

در کیت نواری آزمایش BHCGدر پد کنژوگه (Anti-BHCG(Mouse، در ناحیه ی خط تستAnti-Alpha HCG و در ناحیه ی خط کنترلGoat anti- mouse(از بز استخراج میشود) قرار دارد.

وقتی کیت داخل نمونه قرار میگیرد (نمونه می تواند ادرار و یا سرم باشد) اگر حاوی هورمونHCG باشد در هنگام حرکت نمونه از Sample pad به قمست پد کنژوگه، زنجیره ی B هورمون به Anti-BHCG موجود در کنژوگه پد اتصال می یابد و به راه خود ادامه می دهد و در ناحیه ی خط تست در حضور Anti-Alpha HCG گیر می افتد و در این ناحیه یک خط ایجاد میکند.سایر انتی بادی های متصل نشده یا کنژوگه هایی که در واکنش شرکت نکرده اند با ادامه ی مسیر و رسیدن به خط کنترل با Goat anti- mouse واکنش داده و ایجاد خط می کنند.

در این حالت دو خط رنگی دیده می شود که دال بر مثبت بودن جواب آزمایش است.اگر این هورمون در نمونه وجود نداشته باشد نمونه درحین عبور از کنژوگه پد با Anti-BHCG اتصالی نمی دهد و با ادامه ی مسیر بدون توقف در خط تست به خط کنترل رسیده و در نهایت فقط در آنجا ایجاد خط قابل رویت ایجاد می کند که دال بر منفی بودن پاسخ آزمایش است.

CAM02713

 

CAM02712

*خط کنترل همیشه باید تشکیل شود؛اگر تشکیل نشد تست بی ارزش بوده یعنی کیت مشکل داشته و آزمایش باید یک بار دیگر انجام شود.

*حساسیت این کیت ها به طور معمول 50 mIU/ml است. در حقیقت این کیت ها کیفی است یعنی جواب را در غالب + یا – اعلام میکند اما اگر Count مورد بررسی قرار بگیرد با به دست آوردن اعداد بالای 20 mIU/ml شخص را باردار اعلام می کنیم.

*در صورت درخواست پزشک باید Count توسط آزمایش های دیگر مشخص شود؛تعیین میزان این هورمون از اهمیت خاصی در بارداری، بارداری های کاذب، بارداری های پشت رحم و عدم لانه گزینی مناسب جنین و… برخوردار است.

*این کیت ها به طور معمول برای ادرار توصیه می شود اما در سرم نیز جواب کاملا صحیح و سریع میدهد و قابل استناد نیز است.

مورفین:
در اثر سوء مصرف مواد از جمله تریاک که متشکل از 20 نوع آلکانوئید است، متابولیت های آن در بدن پخش می شود که از جمله ی آنها میتوان به مورفین اشاره کرد.
تریاک (حاوی مورفین)، هروئین (ترکیب تریاک و اسید استیک ، در حقیقت یک استیل مورفین است)، کراک (مورفین خالص) و سوء مصرف مورفین طی این آزمایش مشخص می شود.

*مورفین در تمام مایعات بیولوژیک بدن شخص معتاد یافت می شود اما به عنوان شاخص نمونه ی مورد استفاده را ادرار قرار می دهند.

*این آزمایش در مورد سوء مصرف مواد مخدر صنعتی از جمله: قرص X، آمفتامین، مت آمفتامین، کریستال، شیشه، Ice و … هیچ واکنشی نشان نمی دهد و پاسخ همواره منفی می دهد. برای این موارد آزمایش های دیگری وجود دارد.

*این آزمایش در مورد سوء مصرف مواد در خانواده ی ماری جوانا، حشیش، بنگ، گراس، سیگاری و … نیز قابل استفاده نیست و این موارد هم تست های مخصوص به خود را دارند.

کیت نوار مورفین مقادیر بالای 300 ngr/ml و بالاتر را در ادرار مشخص می کند. این در حالی است که مورفین در تک تک سلول های بدن از جمله مو و ناخن قابل ردیابی است که در مباحث پزشکی قانونی مورد استفاده قرار میگیرد. حتی اگر شخص برای یک بار و تا سه ماه قبل نیز از این مواد استفاده کرده باشد در این تست ها قابل شناسایی است.

در کیت نوار مورفین در ناحیه ی پد کنژوگه Anti morphin- mouse نشاندار داریم. درناحیه ی خط تست خود مورفین قرار دارد اما چون مورفین مولکولی بسیار کوچک است و ممانعت فضایی دارد و در صورت اتصال به کف، آنتی بادی نمیتواند آن را احاطه کند، آن را بر روی یک مولکول بزرگتر به نام آلبومین گاوی سوار میکنیم در نتیجه در خط تستMorphin-BSA را داریم. در ناحیه ی خط کنترل نیزGoat anti_mouseقرار دارد.

پس از قرار دادن نوار در نمونه، اگر نمونه حاوی مورفین باشد با عبور از پد کنژوگه با Anti morphin- mouseاتصال برقرار میکند و با ادامه ی حرکت خود به خط تست می رسد اما به دلیل اینکه مورفین ها کاملا باAnti morphin- mouse اشباع شده اند هیچ واکنشی در این ناحیه صورت نمی گیرد و خطی تشکیل نمی شود و با ادامه ی مسیر و ایجاد خط کنترل ، مسیر به پایان می رسد.
پس در این آزمایش با تشکیل یک خط و آن هم در ناحیه ی کنترل جواب مثبت بوده، اما اگر نمونه فاقد مورفین باشد بدون واکنش در ناحیه ی پد کونژوگه ، وارد خط تست می شود و در آنجا آنتی بادی هایی بخش کنژوگه که با نمونه حمل شده بودند با Morphin-BSA واکنش می دهند و ایجاد خط میکنند؛ پس در صورت رویت دو خط برروی کیت نواری جواب منفی است.

CAM02716

CAM02717

*تداخلات دارویی میتواند موجب دریافت جواب مثبت کاذب شود. مثلا در صورتی که شخص کدئین یا دیفنوکسیلات استفاده کرده باشد نوار پاسخ مثبت می دهد، پس برای جلوگیری از خطا توصیه می کنیم که شخص 48-72 ساعت پیش از آزمایش از مصرف هرگونه دارو خودداری کند.

*جواب منفی این آزمایش با ارزش است و جواب های مثبت برای انجام تست های تائیدی TLC مورد بررسی قرار می گیرند، که این تست کاملا قابلیت تفکیک را داراست.

 

(این نوشته ممکن است دارای نواقص علمی و یا نوشتاری باشد ، لذا نویسنده , سایت با تاکید بر این نکته ، هیچ مسئولیتی در ارتباط با اعتبار این مطلب ندارد.)

11 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی میلاد مسچی

میلاد مسچی
مدیر روابط عمومی نویسنده بخش ایمونولوژی نویسنده بخش باکتری شناسی

12
سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

avatar
7 Comment threads
5 Thread replies
1 Followers
 
Most reacted comment
Hottest comment thread
7 Comment authors
امیدمیلاد مسچیمحمدرضاامیراکبری(سرپرست تیم - مدیر مسئول سایت)میلاد مسچی Recent comment authors
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
امید
Guest
امید

من متادون به مدت 2سال شاید بیشتر مصرف میکردم ودرحال حال ضر ترک کردم وشب ها دارای بی خوابی ودرداعضلانی هستم آیا لستفاده از آلپروزلام نیم ومسکن یا زلوفن زله ای 400 برای تسکین درد و بی خوابی استفاده میکنم آیا تاثیری در تست مورفین یا تست داروهای روان گردان که از طریق آزمایشکاه هاهی رسمی گرقته می شود دارد یا خیر؟ لطفاً راهنمایی فرمائید.ممنومن میشم.

امید
Guest
امید

من متادون تذک کردن ودارای یس خوابی ودرداعضلانی هستم آیا لستفاده از آلپزلام نیم ومسکن یا زلوفن 400 تاثیری در تست مورفین یا تست داروهای روان گردان دارد یا خیر؟ راهنمایی فرمائید.ممنومن میشم

محمدرضا
Guest
محمدرضا

باسلام و عرض ادب
سوالی از محضرتون دارم. اینکه در آزمایش نمونه ادراری که از بنده بعمل اومده قید شده«در بررسی ادرار به روش ایمونوکروماتئوگرافی مورفین مواد مخدر و … در حد قابل شناسایی پیدا نشد. اصولا در جواب آزمایشات اعتیاد منفی یا مثبت اعلام میشود. ولی در آزمایش بنده به این مورد اشاره نشده است. لطفا علت امر را توضیح بفرمایید. سپاسگزارم.

امیراکبری
Admin

سپاس

سورین زادحیدر
Member

مرسی خیلی کامل هست
خسته نباشید

سجّاد علیا
Guest
Sajjad Olya

kheiliam aali. dastet dard nakone

مهرنوش ادیب
Guest
Mehrnoosh Adib

Vaghan khaste nabashid !! Kheili mofid va kamel bud . Mamnoon