آموزش وردپرس
خانه / گزارش کار / ایمونولوژی ( گزارش کار ) / آزمایش ASO یا Antisterptolysin O ( تشخیص تب رماتیسمی)

آزمایش ASO یا Antisterptolysin O ( تشخیص تب رماتیسمی)

ASO:

این تست برای تشخیص بیماری رماتیسم قلبی و گلمرونفریت حاد مورد استفاده قرار میگیرد.

این دو بیماری به وسیله ی عفونت های استرپتوکوکی ایجاد میگردند.باکتری استرپکوک، یک باکتری کوکسی(کروی) و زنجیره ای است. در یک دسته بندی کلی بر اساس میزان همولیز توسط باکتری در محیط کشت Blood Agar، باکتری های استرپتوکوک به 4 دسته تقسیم می شوند.

1) B-Hemolytic strep: همولیز کامل انجام می دهند.

2) Alpha- Hemolytic strep:همولیز ناقص انجام می دهند.

3) Gama- Hemolytic strep: همولیز انجام نمی دهند.

4) Pepto-Hemolytic strep : همولیزهای متفاوت دارند.

اکثر استرپتوکوک های بیماری زا برای انسان در دسته ی B قرار میگیرند. این  گروه بر اساس تفاوت های موجود در کربوهیدرات های دیواره ی سلولی به گروه های Aتا P تقسیم می شوند که به آن تقسیم بندی Lans Field می گویند.

مشخص شده است که اکثر استرپتوکوک های بیماری زا برای انسان جز گروه A از B-Hemolytic strep هستند. به این گروه از باکتری ها، باکتری عفونتهای چرک زا نیز می گویند. این باکتری ها دو بیماری ایجاد میکنند:

1)گلودرد چرکی

2)عفونت های پوستی

نکته ی مهم که در  مورد این گروه از بیماری زا ها وجود دارد آن است که عوارض ثانویه ی خاصی ممکن است بعد از این دو عفونت بروز کند که از این عوارض می توان به رماتیسم قلبی حاد و گلمرونفریت حاد اشاره کرد.

آمار نشان می دهد که %3-2 از گلودردهای چرکی پس از 20 روز ایجاد رماتیسم قلبی ، و اکثر عفونت های پوستی بعد از 10 روز ایجاد گلمرونفریت میکند.

باید توجه داشت که بیماری اولیه ناشی از باکتری های گروه A ازB-Hemolytic strep، گلودرد چرکی و عفونت های پوستی است و دو بیماری گلمرونفریت حاد و روماتیسم قلبی حاد عوارض ثانویه ی این بیماری ها است.

*رماتیسم قلبی به خاطر شباهت یک آنتی ژن( پروتئینM) از این باکتری با یک آنتی ژن عضله ی قلبی (گلیکوپروتئین عضله ی دریچه ی قلب) ایجاد می شود، که یک نوع خود ایمنی بخاطر ترشح بیش از حد آنتی بادی برعلیه آنتی ژن باکتری است.

*برای جلوگیری از عوارض ثانویه در سرماخوردگی های استرپتوکوکی برای شخص بیمار پنی سیلین تجویز میگردد تا مصون بماند.

گلومرونفریت  حاد حدود %95 بهبود میابد اما حدود %5-2 آن ممکن است وارد مرحله ی مزمن شود.

*نکته ی قابل توجه این است که در دوران نهفتگی بیماری (20 روز نهفتگی از گلودرد چرکی تا روماتیسم قلبی و 10 روز نهفتگی از عفونت پوستی تا گلومرونفریت) ممکن است میزان باکتری کاهش یابد پس روش کشت برای جداسازی باکتری ارزش چندانی ندارد.

به همین دلیل برای تشخیص بیماری از تست های سرولوژیک استفاده می شود. در این تست ها عمدتا به دنبال یک آنتی بادی اختصاصی برعلیه آنتی ژن یا توکسین های باکتری هستیم.

توکسین های باکتری استرپتوکوک عبارتند از:

1) توکسین های اریتروژنیک(A,B,C)

2)هیانورونیداز

3)استرپتوکیناز(A,C)

4)DNAase

5)NADase

6)استرپتولیزین(O,S)

که برای هر کدام از آن ها تست سرولوژیک خاص در نظر گرفته می شود.

برای مثال و برای انجام آزمایش سم استرپتولیزینO را بررسی می کنیم:

این سم یک توکسین خارج سلولی (Exotoxin)، حساس به اکسیژن، به شدت ایمونوژنیک( بدن برعلیه آن آنتی بادی اختصاصی تولید می کند)  است و در حالت احیا می تواند RBC را لیز کند.

پس از ورود باکتری به بدن و ترشح سم در صورت تولید آنتی بادی توسط ارگان های دفاعی، سم خنثی می شود و قابلیت لیز RBC را از دست می دهد. بر این اساس تستی به نام  ASO طراحی شده است که اساس آن خنثی سازی(Neutralization) سم استرپتولایزینO  به وسیله ی آنتی بادی های اختصاصی موجود در سرم فرد است.

وسایل مورد نیاز:

IMG-20150416-WA0004

-> نمونه سرم با رقت 1/100 و 1/500 ، بافرASO، سم ASO،لوله ی آزمایش، پیپت مدرج.

برای شروع کار از نمونه ی سرم بیمار دو رقت متفاوت 1/100 و 1/500 تهیه می کنیم.(رقت 1/10 نیز می توان تولید کرد اما چون تیتر آن بسیار پایین و در Range نرمال است از آزمایش با آن صرف نظر می کنیم.)

روش انجام آزمایش به طور کلی 14 لوله ای است، اما به دلیل عدم استفاده از رقت 1/10 از لوله های 1 و 2 استفاده نمی کنیم.

بر روی 12 لوله ی دیگر از 3  تا 14 شماره گذاری می کنیم.لوله های 3 تا 7 مربوط به رقت 1/100 ، لوله های 8 تا 12 مربوط به رقت 1/500 و لوله ی 13 و 14 مربوط به شاهد آزمایش می باشد.

 

Capture

مطابق جدول فوق پس از ریختن حجم های مشخص سرم در لوله های 3 تا 12، حجم آنها را توسط بافر ASO به 1cc می رسانیم. سپس به آنها مقادیر مشخص شده ای سم استرپتولیزین O اضافه می کنیم. در لوله 13 به عنوان شاهد RBC فقط بافر می ریزیم(1.5cc) و در لوله ی 14 به عنوان شاهد   SLO مقدار 1cc بافر و 0.5cc سم اضافه می کنیم. لوله ها را به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه می کنیم و سپس به تمامی لوله ها سوسپانسیون خون+O اضافه می کنیم. پس از مخلوط کردن محتویات لوله ها، آنها را به مدت 45 دقیقه در 37 درجه انکوبه می کنیم؛ لوله ها را سانتریفوژ کرده و آنها را مطالعه میکنیم.

IMG-20150416-WA0010

لوله ها را یک به یک با شاهدها مطابقت می دهیم، آخرین لوله ای که هیچ لیزی در RBC های آن مشاهده نشد تیتر سرم آن به عنوان تیتر آزمایش گزارش می شود. در صورت مشاهده ی لیز ناقص، لوله ی قبلی به عنوان تیتر سرم گزارش می گردد.(در اینجا تیتر مربوط به لوله ی هفت را تیتر آزمایش اعلام می کنیم یعنی 323Todd .)

IMG-20150416-WA0005

*در حقیقت طی آزمایش سرم در مجاورت سم استرپتولایزینO قرار می گیرد و در صورتی که شخص آنتی بادی بر علیه این سم داشته باشد لیز در RBCها مشاهده نمی شود ولی در صورت عدم وجود رقت مناسب آنتی بادی گلبول های قرمز لیز می شوند.

* در لوله ی 13 فقط RBC و در لوله ی 14 سم استرپتولایزینO و RBC ریخته شده است؛ به این ترتیب لوله ی 13 شاهد عدم لیز(شاهد RBC) و لوله ی 14 شاهد لیز RBCها(شاهد SLO) محسوب می شوند.

DSC_0032

واحد گزارش تیتر Todd است.

* Todd: مقداری از آنتی بادی که بتواند 2.5 دوزِ حداقلِ همولایتیک را خنثی کند.

* دوز حداقل همولایتیک: میزانی از همولایزین است که 0.5cc از آن بتواند 0.5cc از RBCهای %5 را در 37 درجه سانتی گراد لیز کند.

>>براساس تعریف Toddشخص نرمال تیتر کمتر از 250 و شخص بیمار تیتر بالای 250 را نشان می دهد.<<

نکته: ارزشمند بودن تست مبنی بر تکرار آن طی یک الی دو هفته پس از انجام آزمایش می باشد.

 

(این نوشته ممکن است دارای نواقص علمی و یا نوشتاری باشد ، لذا نویسنده , سایت با تاکید بر این نکته ، هیچ مسئولیتی در ارتباط با اعتبار این مطلب ندارد.)

39 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی میلاد مسچی

میلاد مسچی
مدیر روابط عمومی نویسنده بخش ایمونولوژی نویسنده بخش باکتری شناسی

سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

9 نظر در مورد "آزمایش ASO یا Antisterptolysin O ( تشخیص تب رماتیسمی)"

avatar
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
لیلا
Guest

با عرض سلام،جواب ازمایش ASO من 400 بود.یعنی من تب رماتیسمی دارم؟

امیراکبری
Admin

استفاده از جدول ، به انجام مراحل کمک زیادی می کرد ، خسته نباشید

سحر شبرنگ
Guest

با تشکر از شما مطالب بسیار جامع و مفید بود

سورین زادحیدر
Member

تصاویر بسیار موثر بود در یادگیری
ممنون

مهدیس مختار
Guest

ممنون آقای مسچی!
کامل بود.