کاربرد تست الایزا در آزمایشگاه ویروس شناسی(تست Anti-HBsAg)

به طور کلی تست الایزا در آزمایشگاه ویروس شناسی در دو مورد استفاده میشود:

1-تشخیص آنتی ژن:با توجه به ماهیت ویروس ها تعداد کمی از آنها ویرمی بالا را سبب میشوند و امکان ردیابی آنتی ژن در خون وجود دارد.مثال بارز :اندازه گیری HBsAg.

در نسل های جدید کیت های تشخیص HIV سعی شده است تا ردیابی آنتی ژن P24 نیز در دستور قرار گیرد.

2-تشخیص آنتی بادی (کاربرد اغلب تست های الایزا):در مواقعی که قادر به پیدا کردن ویروس نباشیم تشخیص آنتی بادی میتواند دلیلی بر وجود یک عفونت باشد.دوره نقاهت یک بیماری و سیر بیماری  را نیز بدین وسیله میتوان ارزیابی کرد.

مثال بارز دز تشخیص آنتی بادی :CMV یا Cytomegalo Virus  که در این موارد با ردیابی آنتی بادی برعلیه سایتومگالو ویروس تشخیص داده میشود که فرد با ویروس آلوده شده یا نه .

با تعیین نوع آنتی بادی که از کلاس IgG یا IgM  است میتوان به حاد یا مزمن بودن بیماری  پی برد.

کلیات روش الایزا: روش الایزا در زیرمجموعه ی تست هایی قرار میگیرد که اصطلاحا به آن ها EIA یا Enzyme Immuno Assay گفته میشود.ویژگی تست های EIAاین است که در آن آنتی بادی یا ماده کونژوگه به آنزیم متصل است و با ردیابی آنزیم به اتصال آنتی ژن آنتی بادی پی برده میشود.آنزیم مورد استفاده  HRPیا Horse Radish Peroxidase و کروموژن TMB است که در نهایت رنگ آبی حاصل خواهد شد.

تست اندازه گیری Anti HBsAg :

هپاتیت B نوعی بیماری ویروسی در انسان‌هاست که به کبد بیشترین آسیب را می‌زند. ویروس این بیماری یکی از جدی‌ترین انواع هپاتیت را سبب می‌شود.

هپاتیت B قدرت انتقال بسیار بالایی دارد و بسیار عفونی است .در برخی از افراد به سمت مزمن شدن و سیروز های کبدی پیش میرود که خطرناک میشود.

واکسن هپاتیت B هم اکنون جزو برنامه سراسری واکسیناسیون قرار دارد و در بدو تولد تزریق میشود که میتواتد در بدن محافظت کننده باشد که بستگی به کیفیت واکسن و پاسخ ایمنی افراد دارد.

اگر آنتی بادی در سطح مناسب تولید شود بدن فرد به یک سطح محافظتی میرسد که در برخورد با یک آلودگی اتفاقی , اجازه ی ورود ویروس به کبد و تکثیر آن داده نمیشود.در واقع راه های معمول انتقال آن مسدود میشود.اما در مواردی مانند انتقال خون آلوده واکسن کارساز نیست.

دسته ای از افراد هستند که در اثر تزریق واکسن سیستم ایمنی آنها تحریک نمیشود.برای بررسی این موضوع و همچنین میزان ایمنی که چه میزان نگه دارنده است , از کیتی استفاده میشود که آنتی بادی ضد HBsAg را اندازه گیری میکند.

طراحی کیت به گونه  ای است که در کف پلیت الایزا آنتی ژن recombinant , HBsAg وجود دارد. سرم فرد به آن اضافه میشود.اگر فرد علیه HBsAg آنتی بادی داشته باشد ,متصل میشود.در مرحله ی بعد کونزوگه -anti human antibody متصل به آنزیم HRP-اضافه میشود و در نهایت با اضافه کردن سوبسترا کروموژن تشکیل رنگ خواهیم داشت و بدین صورت آنتی بادی Detect میشود.

مراحل کار:

1.اضافه کردن سرم فرد به پلیت الایزا

2.اضافه کردن کونژوگه

3.انکوباسیون در 37 درجه به مدت 30 دقیقه

4.شستشو (5 مرتبه)

5.اضافه کردن کروموژن

6.انکوباسیون در تاریکی به مدت 15 دقیقه :زیرا شکست خودبخودی H2O2 در اثر نورهای مزاحم ممکن است صورت گیرد و در این صورت تغییر رنگ خواهیم داشت.

7.اضافه کردن STOPPING(محلول متوقف کننده واکنش) که یک اسید است و تغییر رنگ از آبی به زرد را سبب میشود و جذب نوری در 450 نانومتر خوانده میشود.

با توجه به این که کیت کمی است تعدادی کالیبراتور داریم که غلظت آنها مشخص است.جذب نوری کالیبراتورها را دستگاه میخواند و نموداری استاندارد رسم میکند  که در آن روی محور x  مقدار آنتی ژن و روی محور Y میزان جذب نوری در 450 نانومتر قرار میگیرد.

در واقع اعداد کالیبراتور برای دستگاه تعریف میشود و خود دستگاه نمودار رسم میکند و جذب نوری نمونه مجهول را با جذب های کالیبراتور مقایسه میکند و عدد به دست می آید.

تفسیر تست:

>=11mIU/ml   :آنتی بادی به میزان مناسب در سرم فرد وجود دارد.

9mIU/ml>   :آنتی بادی به میزان مناسب در سرم وجود ندارد و باید دوزهای یادآور واکسن دوباره تزریق شود.

جهت اطلاعات تکمیلی از روش الایزای کمی میتوانید از گزارش کار مربوطه در مبحث ایمونولوژی موجود در سایت نیز استفاده کنید.

این نوشته ممکن است دارای اشکالات علمی یا نوشتاری باشد.