آموزش وردپرس
خانه / گزارش کار / هورمون شناسی (گزارش کار ) / اندازه گیری FSH به روش الایزا

اندازه گیری FSH به روش الایزا

.ابتدا از تمام استاندارهای کیت، λ50 به ترتیب افزایش غلظت ،داخل چاهک‌های جداگانه می‌ریزیم.(در این جا 6 محلول استاندارد داریم)
*در هنگام سمپلینگ از تماس نوک سرسمپلر با ته چاهک خودداری نمایید و نمونه‌ها را وسط چاهک‌ها بریزید.
*این روش به صورت غیر رقابتی ست و در انتهای چاهک‌ها آنتی‌بادی ضد FSH کوت شده است.
fsh

fsh2

2.از هر نمونه بیمار λ50،به صورت جداگانه داخل چاهک‌ها می‌ریزیم.

fsh3

3.حال λ100 آنزیم کنژوگه را داخل تمام چاهک‌ها می‌ریزیم.پلیت را به مدت 15 ثانیه خوب تکان می‌دهیم و سپس دهانه‌ی چاهک‌ها را با چسب می‌بندیم و( 30)10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه می‌کنیم.
*مدت زمان Incubation به دلیل ماهیت آموزشی این تست،کاهش پیدا کرده است. لذا زمان های واقعی داخل پرانتز ذکر شده‌اند.

fsh4
4.چسب‌ را برداشته و محتویات چاهک‌ها را تخلیه می‌کنیم و سپس 3بار(5بار) با حلول شست و شو ( مثل PBS) می‌شوییم و پس از هربار شست و شو با گاز و زدن ضربه خشک می‌کنیم.

fsh11

 

5.به تمام چاهک‌ها λ100 محلول کروموژن اضافه می‌کنیم.

fsh13

6. 5 (15) دقیقه در تاریکی‌ و دمای اتاق انکوبه می‌کنیم.
*نورهای مزاحم ممکن است موجب تغییر رنگ و ایجاد خطا در آزمایش شوند،به همین دلیل انکوباسیون بعد از افزودن کروموژن بهتر است در تاریکی(مثلا داخل کشو) انجام شود.
7.پس از انکوباسیون در تاریکی، λ100 محلول stopping به تمام چاهک‌ها اضافه می‌کنیم تا واکنش متوقف شود.

fsh15

حال پلیت را به دستگاه الایزا ریدر می‌دهیم تا میزان نور عبوری نمونه‌ها را به ما بدهد.در حقیقت با رسم نموداری برحسب غلظت و نور عبوری و با داشتن غلظت محلول‌های استاندارد و میزان نور عبوری نمونه‌ها و محلول‌های استاندارد،به غلظت آنالیت مورد نظر پی می‌بریم.
برای اطلاعات تئوری بیشتر راجع به ELISA به لینک‌های زیر مراجعه کنید:

واکنش های ایمونواسی

EIA یا Enzyme Immuno Assay

تست الایزای کیفی

کاربرد تست الایزا در آزمایشگاه ویروس شناسی

 

9 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی سجّاد علیا

سجّاد علیا
مدیر اجرایی وبسایت علوم آزمایشگاهی پزشکی و بالینی نویسنده بخش خبری نویسنده بخش ایمونوهماتولوژی نویسنده بخش هورمون شناسی نویسنده بخش بیوشیمی پزشکی

1
سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

avatar
1 Comment threads
0 Thread replies
0 Followers
 
Most reacted comment
Hottest comment thread
1 Comment authors
ساغر Recent comment authors
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
ساغر
Guest
ساغر

ممنونم عالی بود