آموزش وردپرس

تهیه سوسپانسیون

سیستم ABO:

مهم ترین سیستم گروه خونی می باشد که آنتی ژن های این سیستم روی گلیکوپروتئین های سطح غشای rbc شکل می گیرند(برخلاف سیستم Rh که روی پروتئین ها تشکیل می شوند).این سیستم محدود به  rbcها نیست و در ترشحات بدن نیز ممکن است باشد درحالی که Rh فقط محدود به rbc ها می باشد.
لندشتاینر پس از مشاهده ی واکنش میان خون همکارانش به این نتیجه رسید که خون آنها ناسازگار بوده و توانست گروه های خونی را کشف کند.در قانونی تحت عنوان قانون لندشتاینر وضع کرد که بیان می دارد آنتی بادی های گروه ABO به طور طبیعی در بدن افراد وجود دارند،یا به بیان دیگر آنتی ژنی که در سطح rbc وجود دارد،آنتی بادی آن در بدن فرد نیست.
یکی از مهمترین کاربرد های ایمونوهماتولوژی، تشخیص نا سازگاری های خونی و به حداقل رساندن آنها در انتقال خون است.
آنتی بادی های گروه O:

AntiA,Anti B,Anti AB . جنس Anti AB از نوع IgG می باشد در حالی جنس Anti A و Anti B از نوع IgM می باشد.
آنتی بادی هایی که دارای اهمیت بالینی هستند:
1-آنتی بادی های گروه ABO
2-Anti H برای گروه خونی بمبئی
3-آنتی بادی های گروه Rh در برخورد دوم(چراکه در برخورد دوم سلول های خاطره ای تولید شده و واکنش شدید تری داریم.)
آنتی بادی های گروه ABO از 3-6 ماهگی در بدن تولید می شوند اما آنتی بادی های گروه Rh پس از برخورد اول در بدن ایجاد می شوند.
سیستم ABO روی کروموزوم 9 و سیستم Rh روی کروموزوم 1 قرار دارد.
ساختمان آنتی ژن H:
11

پیش ساز روی گلبول های قرمز شامل گلوکز،گالاکتوز و N-Acetyl glu Amin می باشد.
برای تولید آنتی ژن H،فوکوز توسط فوکوزیل ترنسفراز به گالاکتوز اضافه می شود.
برای تولید آنتی ژن N ،A-استیل گالاکتوز آمین تزنسفراز، N-استیل گالاکتوز آمین را به آنتی ژن H اضافه می کند.
برای تولید آنتی ژن B،گالاکتوز توسط آنزیم گالاکتوزیل ترنسفراز به آنتی ژن H اضافه می شود.
آنتی بادی های سرم فرد گروه خونی بمبئی:Anti A,Anti B,Anti AB,Anti H
جنس Anti H از IgG می باشد.
سیستم Rh:

این سیستم یک کمپلکس آنتی ژنی است که شامل D,C,E,c,e می باشد.که اگر آنتی ژن D را داشته باشد مثبت و در صورت فقدان آن منفی محسوب می شود.
Rh منفی: قطعه کروموزوم 1 وجود دارد ولی ژن D وجود ندارد.
Rh null:کل قطعه ای از کروموزوم 1 که سیستم Rh را رمزدهد می کند،وجود ندارد.
در حال rbc، Rh null ها به صورت استوماتوسیت هستند اما در سسیستم ABO تاثیری در ساختار rbc ها ندارد،چرا که سطحی تر هستند.
واکنش های Ag-Ab:
1-Ag محلول:پرسیپیتاسیون 2-Ag نا محلول:آگلوتیناسیون
در بانک خون به واکنش های نا سازگار خون،هم آگلوتیناسیون می گویند.
اگر میطان واکنش ها کم باشد مجبوریم به واکنش مواد فلورسانس ویا آنزیم و…. اضافه کنیم.
عوامل دخیل در واکنش Ag-Ab:
1-PH
2-دما
3-مقدار آنتی ژن
4-مقدار آنتی بادی
5-شرایط واکنش
PH:معمولا PH=7 مناسب ترین PH است و در PH اسیدی سرعت واکنش کاهش می یابد.
دما:بسته به نوع آنتی بادی متفاوت است به عنوان مثال ماکزیمم دمای IgM چهار درجه سانتی گراد و IgG سی و هفت درجه می باشد.
مقدار Ag و Ab:باید میزان متناسب باشد و در منطقه zone واکنش انجام شود (برای بهترین نتیجه).
اگر میزان Ab زیاد باشد،منطقه pro zone و اگر میزان Ag زیاد باشد،منطقه post zone می باشد .
تفاوت A1 و A2:تعداد جایگاه های آنتی ژن H که تبدیل به A شده در A1 بسیار زیاد است و در A2 این گونه نیست.در نتیجه واکنش Anti A با گروه A1 شدید تر است.
حدود 8% افراد A2،دارای Anti A1 هستند.
شرایط واکنش:
تفاوت سرم و پلاسما:سرم فاقد پروتئین ها و فاکتور های انعقادی است.
پروتئین های اضافی مثل فاکتور های انعقادی می توانند در آزمایش ما تداخل ایجاد کنند که این ها باید از واکنش حذف شوند.برای این کار شست و شو می دهیم و سپس سوسپانسیون تهیه می کنیم.
شست و شوی خون:ابتدا خون بیمار را جدا می کنیم و داخل لوله ریخته و به آن سرم فیزیولوژی اضافه می کنیم و سپس با دور 2000-3000 به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ می کنیم.
3بار همین کار شست و شو را انجام می دهیم که پس از 3 بار سوسپانسیون ما حاوی rbcهای شسته و تمیز است.
انواع سوسپانسیون:
1- 2-5%: برای مثال سرم فیزیولوژی 95ml  به علاوه 5ml rbc
2- 50% : که یا خون فرد نرمال و در واقع همان هماتوکریت می باشد که در روش اسلایدی استفاده می شود.
شدت واکنش های مثبت Ag-Ab:
+4 :واکنش آگلوتیناسیون به صورت یک تکمه بزرگ سلولی و محلول رویی با زمینه صاف
+3 :آگلوتیناسیون به صورت چند تکه بزرگ و محلول رویی با زمینه صاف
+2 :آگلوتیناسیون به صورت تکه های ریز فراوان و محلول رویی با زمینه کدر
+1 :آگلوتیناسیون به صورت تکه های بسیار ریز در زمینه کدر
Mix field: چون تعداد واکنش ها بسیار کم است فقط با میکروسکوپ دیده می شوند.
عنوان آزمایش: تهیه سوسپانسیون 2-5%
هدف:تهیه سوسپانسیون 2-5% گلبول قرمز جهت حذف پروتئین های اضافی و واکنش های کاذب برای تعیین گروه خونی.
روش کار:
1-ابتدا لوله CBC حاوی EDTA را تکان می دهیم تا خون هموژن شود. (شکل 1)
2-0.5-1 میلی لیتر از خون داخل لوله توسط پیپت بر می داریم. (شکل 2)
3-خون داخل پیپت را درون لوله ای جداگانه تخلیه می کنیم. (شکل 3)
4-تقریبا تا ¾ لوله را سرم فیزیولوژی می ریزیم. (شکل 4)
5-در لوله را با پارافیلم بسته و چند بار لوله را سر و ته می کنیم. (شکل 5)
6-با دور 2000-3000 به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ می کنیم(بالانس لوله ها فراموش نشود). (شکل 6)
7-لوله را از سانتریفیوژ بیرون آورده و مایع رویی را کامل تخلیه می کنیم. (شکل 7و8)
8-سه مرتبه مراحل شست و شو(مراحل 4-7) را تکرار کرده و سپس به سوسپانسیون مورد نظر می رسیم. (شکل 9)

 

 

20160309_101815 (Copy)

 

20160309_101932 (Copy)

 

20160309_102042 (Copy)

 

20160309_102123 (Copy)

 

20160309_102202 (Copy)

 

20160309_102232 (Copy)

 

20160309_103426 (Copy)

 

20160309_103432-1 (Copy)

 

20160309_104430 (Copy)

 

6 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی ترانه رضائی

نویسنده بخش خون شناسی

1
سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

avatar
1 Comment threads
0 Thread replies
0 Followers
 
Most reacted comment
Hottest comment thread
1 Comment authors
روشنک داودیان Recent comment authors
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
روشنک داودیان
Guest
روشنک داودیان

خیلی کامل بود
ممنون