آموزش وردپرس
خانه / گزارش کار / بیوشیمی ( گزارش کار ) / اندازه گیری فعالیت آمیلاز

اندازه گیری فعالیت آمیلاز

Amylase

همان گونه که از نام این آنزیم پیداست،آنزیم تجزیه کننده نشاسته است. بیشترین بافت ترشح کننده ی آمیلاز،پانکراس است اما از غدد بزاقی و به میزان کمتر از گلبول های سفید و لوله ی فالوپ  نیز ترشح میشود.

اهمیت بالینی:

بیشترین کاربرد پزشکی آن در بررسی عملکرد پانکراس و بیماری های پانکراتیک است. اما بدلیل ترشح از غدد بزاقی،در هرگونه ترومای فک و صورت از جمله در بیماری اوریون بالا میرود.

شرایط بیمار و نمونه:

آزمایش معمولا روی نمونه سرم و ادرار انجام میگیرد. به دلیل اهمیت زیاد یونهای کلسیم برای فعالیت آمیلاز (یون کلسیم بعنوان کوفاکتور آمیلاز عمل میکند)،استفاده از ضد انعقادهای سیترات،EDTA یا اگزالات برای تهیه نمونه پلاسما مناسب نیست.

آمیلاز سرم یا ادرار پایدار است و فعالیت آن یک هفته در دمای اتاق و 2 ماه در دمای °4 پایدار است.

روش های اندازه گیری:

به چهار دسته طبقه بندی میشوند:

  • آمیلو کلاستیک
  • ساکاروژنیک
  • کروموژنیک
  • پایش مداوم

روش های آمیلوکلاستیک:

زنجیره های خطی نشاسته در حالت مارپیچی با  ید (I) مولکولی واکنش نموده و کمچلکس آبی رنگ “نشاسته – ید” را بوجود می آورند. هیدرولیز نشاسته به دکسترین ها و الیگو ساکاریدها،همراه با کاهش تدریجی توانایی اتصال به ید میباشد که نتیجه ی آن کاهش شدت رنگ آبی به آبی کمرنگ،بنفش و سپس تبدیل  به قرمز میشود.وقتی تعداد واحدهای قندی موجود در ساختمان الیگو ساکارید به 6 عدد ویا کمتر رسید،دیگر هیچ رنگی بوجود نمی آید. با پیشرفت هیدرولیز،کدورت محلول نیز از بین رفته و بر حسب همین کاهش کدورت، از طریق روش های کدورت سنجی، فعالیت آمیلاز اندازه گیری میشود.

روش های ساکاروژنیک:

این روش ها بر اساس اندازه گیری مواد احیا کننده ی حاصل هیدرولیز نشاسته (قندها و دکسترین ها) استوار است. برای اندازه گیری ترکیبات احیا کننده ممکن است از روش هایی نظیر” فولین-وو” و” سوموگی- نلسون” استفاده گردد و نتیجه ممکن است بر حسب سوموگی یعنی میزان فعالیتی ازآمیلاز که یک میلی گرم گلوکز را پس از انکوباسیون سرم و نشاسته به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه از نشاسته جدا می کند،بیان گردد. برای  تبدیل سوموگی به واحد بین الملل میتوان از فاکتور 1.85 استفاده کرد.

روش های کروموژنیک:

در این روش ها از سوبسترای نشاسته ای اسفاده میشود که با استفاده از اتصال یک ماده رنگی،نا محلول شده است.در اثر تجزیه ی این سوبسترای نشان دار قطعات کوچکتر متصل به رنگ تولید میشود که در آب محلول هستند و سبب افزایش شدت رنگ محلول میشوند.این افزایش شدت رنگ متناسب با فعالیت آمیلاز موجود در نمونه است.

روش های پایش مداوم:

از سیستم های آنزیمی جفت شده میتوان برای پایش مداوم تغییرات حاصل از فعالیت مداوم آمیلاز استفاده نمود.در یکی از آزمون ها،از مالتوپنتوز(حاوی 5 واحد گلوکز) استفاده میشودکه در اثر فعالیت آمیلاز،نمونه به مالتوتریوز و مالتوز تجزیه میگردد.

 

 amylase 1

 

 در ادامه،آنزیم αگلوکوزیداز با تجزیه مالتوز و مالتو تری اوز تولید 5 مولکول گلوکز مینماید.

amylase 2

 سپس مولکولهای گلوکز در واکنش هگزو کیناز تولید گلوکز6-فسفات میکند.

amylase 3

در نهایت گلوکز 6فسفات توسط گلوکز 6فسفات دهیدروژناز اکسیده میگردد که این اکسیداسیون همراه با تبدیل NAD به NADH بوده و منجر به افزایش جذب نوری در 340nm میشود.

amylase 4

 

مراحل انجام آزمایش:

ابتدا دو لوله ی نمونه و بلانک آماده میکنیم.

مطابق جدول،در هر دو لوله 1ml از معرف R میریزیم.

11

 سپس 5 دقیقه در بن ماری 37 قرار میدهیم.

حال 20µl از نمونه را داخل لوله نمونه میریزیم.

22

 سپس مخلوط کرده و لوله ها را دقیقا 7.5 دقیقه در بن ماری 37 قرار میدهیم و پس از 7.5 دقیقه بلافاصله واکنش را با اضافه کردن محلول کار ید و آب مقطر متوقف میکنیم.

33

مخلوط میکنیم و جذب بلانک و نمونه را در مقابل آب مقطر میخوانیم و از فرمول زیر میزان فعالیت آنزیمی آمیلاز را محاسبه میکنیم:

44

Sajjad Olya

این نوشته ممکن است دارای نواقص علمی و یا نوشتاری باشد ، لذا نویسنده , سایت با تاکید بر این نکته ، هیچ مسئولیتی در ارتباط با اعتبار این مطلب ندارد.

5 like
Print Friendly, PDF & Email

درباره ی سجّاد علیا

سجّاد علیا
مدیر اجرایی وبسایت علوم آزمایشگاهی پزشکی و بالینی نویسنده بخش خبری نویسنده بخش ایمونوهماتولوژی نویسنده بخش هورمون شناسی نویسنده بخش بیوشیمی پزشکی

6
سوال یا نظری دارید؟ بنوبسید

avatar
5 Comment threads
1 Thread replies
0 Followers
 
Most reacted comment
Hottest comment thread
5 Comment authors
baharvandپیام آگاه پناه ( بخش خبری )mese chiسجّاد علیادنا شیرانی Recent comment authors
  Subscribe  
newest oldest most voted
Notify of
baharvand
Guest
baharvand

سلام، من با ترسیم نمودار استانداردDNSبرای قنداحیائ در راستای کارم میزان جذب را در شرایط مد نظرم بدست آوردم. ی نکته اینجا فعالیت آنزیم آلفا-آمیلاز :یک واحد آنزیمی شامل میزانی از آنزیم است که در یک میکرو مول قند احیاء را تحت شرایط * ودر مدت یک دقیقه آزاد نماید. حال در معادله بالا 1470 مربوط به چه پارامتری است. مرسی از پاسخ

امیراکبری
Admin

کامل و خوب ..مرسی

mese chi
Guest
mese chi

agha kheyli khub bud avariiiiiin…:D

امیراکبری
Admin

MerC Milad jouououn

امیراکبری
Admin

خیلی ممنون

دنا شیرانی
Guest
Dena sh

خیلی خوب,دستتون درد نکنه